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染色體畸變測試程序是怎樣的

發布時間:2022-04-20      點擊次數:84
   染色體畸變試驗用于鑒定在培養的哺乳動物體細胞中引起結構染色體畸變的物質??蓱糜谝呀⒌募毎?、細胞株或原代細胞培養,根據培養生長能力、核型的穩定性、染色體數目、染色體差異以及染色體響變的自發頻率選擇合適的細胞。
  染色體畸變測試程序如下:
  1.染色體畸變測試可以在原代人外周血淋巴細胞(HPBL)或已建立的細胞系中進行,例如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞。
  2.在存在和不存在代謝活化(S9)的情況下,將培養物與幾種濃度的測試化合物一起培養3到4小時,并在不存在S9的情況下培養21小時。
  3.陽性結果的特征是異常細胞在統計上顯著的、劑量依賴性的增加,超過了歷史的陰性對照限制。
  染色體畸變試驗操作方法:
  受試物處理:在有和無代謝活化系統條件下,以受試物染毒處于增殖期的細胞。淋巴細胞應在有絲分裂刺激后的48h開始染毒。一般對每個濃度和陰性/溶劑對照應該用雙份平行培養物。當本底資料可以證明雙份平行培養物之間變異較小時,對每個濃度改用1個培養物也可以接受。氣態或揮發性物質應以適當的方法試驗,如用密閉的培養瓶。
收獲時間:
  在一次試驗,細胞應在有和無代活化條件下染毒3~6h,并在染毒開始后約1.5倍的正常細胞周期時采樣。如此方案在有或無代謝活化時均為陰性結果,應再進行一次無代謝活化的試驗,適當延長染毒時間。某些化學物在染毒/采樣時間長于1.5倍正常細胞周期時更易檢測。在有代謝活化條件下得到陰性結果,需要根據情況予以證實。如認為陰性結果不必進行證實,應提供適當理由。
  染色體制備:在收獲前以秋水仙素或秋水仙胺處理細胞培養物1~3h。各個細胞培養物分別收獲和低滲、固定和染色,以制備染色體。
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